实时荧光定量PCR仪 采购要领！

   荧光定量PCR仪在国内市场推广从98年开始已经经历了6年，从开拓者PE（ABI）到ROCHE,再到后来鱼龙混杂

                所谓real-time Q-PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基因，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

实时荧光定量PCR仪 采购要领！

        目前购买荧光定量PCR仪系统，一般包括：

        实时荧光定量PCR仪 +实时荧光定量PCR仪 开机检测试剂+通用电脑+自动分析软件  

        荧光定量PCR仪 组成：温控模块、光学系统（光源、检测器、光路传导） 

采购要领

1、 温控模块/Peltier：

       普通的Peltier加热方式具有明显边缘效应，均一性差，是上一代的模块PCR加热技术，正处于被淘汰的边缘。

       目前最好的温控模块：银，在金属中银的导热性能较高，升降温速度快，孔间温度均一性好，边缘效应相应减少

         金属的热传导系数表： 

         银 429 ＞铜 401 ＞ 金 317 ＞铝 237  ＞铁 80 ＞锡 67  ＞ 铅 34.8

另：

       单一模块升降温速度高并不代表样本升降温速度也高，因此在温控模块升降温速度对比中，最终是要看样本的升降温速度是否快

       最大升降温速度不等与平均升降温速度

2、  光源：

       光强比较：髙强度白光LED ＞ 卤钨灯 ＞单色LED

       白光LED的亮度约是卤钨灯的3倍左右，单色LED的10倍左右，能够捕捉到更多的荧光信号，是专业光源领域的最新技术代表，2011年开始普遍应用于专业仪器，无论光强、灵敏度与均一性可与上一代氙灯光源媲美，且寿命提升了10倍以上。

钨灯灯丝本身存在闪烁不稳定的问题，其激发能量远低于白光LED，事实上，无需高端品牌汽车的旗舰概念车，如丰田雷克萨斯，已经开始使用白光LED作为车头灯。

       寿命比较：髙强度白光LED = 单色LED  ＞卤钨灯

       白光LED的寿命长达10000小时以上，一般可以使用5-10年左右，基本上超过了一般科研仪器的正常工作寿命，基本终身无需更换光源，而卤钨灯光源基本每2年就要更换一次，费时费力，南方更是不足一年就要更换一次

另：

卤钨灯每次运行需要半小时预热，其中累计散发的热量对荧光具有明显的淬灭作用。

3 、 检测器：

 荧光定量PCR灵敏度：冷CCD ＞CCD ＞光电倍增管 CPM  ＞光电二极管

        CCD作为荧光信号的接受器，其质量直接决定了仪器的检测灵敏度和稳定性。

10℃的冷CCD，和常温CCD有着质的区别，在专业光学领域，冷CCD的造价成本至少要比常规CCD高出一倍以上。冷CCD在更低的温度下进行光信号捕捉，能够提供更高的光感灵敏度和更低背景噪音。因此，有的荧光定量PCR能够稳定区分1000和2000拷贝的浓度差异，而有的只能做到区分5000和10000个拷贝数。

4 、光路传导：：

         光路的传导 光路设计应尽可能有效消除边缘效应，光路设计是否有效消除边缘效应，只有实验才能检验

         检验方法：96/384孔板中及四角各布置标准品，看差异

         其中     

         a 光源直接照射微孔板上：边缘效应明显

         b 逐孔移动式采光：无边缘效应，但需时常校正 

         c 散射采光：边缘效应较明显，切换光源时需要光源组件移动